纳米抗体筛选

只由重链可变区组成的单域抗体，称为纳米抗体（Nanobody），又称VHH。分子量15kD左右，是自然存在最小的功能性抗原结合片段。

与传统抗体相比，具有更高的亲和力与稳定性、容易制备、免疫原性低、可溶性好、穿透力强等特性。在癌症、自身免疫病、呼吸系统疾病、血液系统疾具备独特的开发应用价值。

该酿酒酵母表面展示使用α-凝集素系统，α-凝集素由2个核心亚单位Aga1和Aga2组成。在此系统中，编码Aga1蛋白的基因稳定地整合到酵母染色体中，而Aga2克隆到环状酵母展示质粒载体中。在半乳糖诱导表达后，Aga1锚定在细胞壁上，外源蛋白和Aga2融合表达，在信号肽的引导下分泌表达，Aga2通过两个二硫键与α-凝集素Aga1蛋白共价连接形成共价复合物，以这种方式实现目的蛋白的细胞表面展示。

我们使用nanobody的全合成文库，酵母菌株为Saccharomyces cerevisiae EBY100，展示质粒为pYDS649，文库大小约 5.6×10⁸.

我们使用磁珠分选（MACS）和流式分选（FACS）相结合的方法来筛选纳米抗体。

一般情况下，纳米抗体和抗原的亲和力可以达到nM。

以50 kD蛋白为例，MACS和FACS大约需要0.5mg蛋白。分子筛和SPR所需抗原蛋白量和需要验证的纳米抗体的数量有关，每个nanobody的验证大约需要0.3mg抗原蛋白。

用于MACS和FACS的抗原蛋白，可选择做FITC标记、生物素化标记，或带Flag标签等。

用于分子筛和SPR结合验证的抗原蛋白，无需特殊标记。

一般需要2.5-3个月（包含分选，nanobody质粒合成、蛋白纯化，结合验证等）。