蛋白制备

佰翱得蛋白，结构生物学家的信赖之选

无细胞蛋白质表达系统

无细胞蛋白表达（Cell-Free Protein Synthesis，CFPS）是一种体外重组蛋白质表达技术，是以类似“一锅法”化学反应的方式进行目标蛋白质合成的体外翻译系统。该系统直接利用含有天然细胞转录和翻译机制的细胞裂解物，通过添加目标基因和适当的辅助因子如氨基酸、能量底物和盐，数小时内在体外实现目标蛋白质的合成。该系统绕过了复杂的细胞培养和表达优化过程，提高了蛋白质合成的效率和灵活性，适用于制备各种类型的蛋白质，尤其是难表达蛋白质、毒性蛋白质以及复杂蛋白质等的表达纯化。

无细胞蛋白质表达系统优势

简单快速

4小时内完成表达，1天内完成从SDS-PAGE、FSEC、TSA以及生物活性检测。

高通量

适用于多种表达载体和宿主系统（大肠杆菌、昆虫、哺乳细胞），模板灵活，PCR产物、mRNA以及质粒都可作为表达模板，且可以在多孔板上进行表达筛选，适用于高通量蛋白质组学研究。

适用广泛

开放式反应系统使反应条件易于更改，适用于包括膜蛋白、毒性蛋白等蛋白的表达及多种蛋白修饰，如同位素标记及非天然氨基酸标记等。
Biortus E.coli 无细胞蛋白质表达系统

无细胞蛋白质表达系统的应用

  • 1
    高通量筛选和蛋白制备
  • 2
    ug到mg级别体外重组蛋白的快速制备
  • 3
    NMR（15N和13C同位素标记）以及非天然氨基酸的掺入
  • 4
    X-ray & Cryo-EM的样品快速制备

服务流程

步骤 服务项目 服务说明 佰翱得特色 周期
01 模板质粒构建 密码子优化及全基因合成 为提高蛋白的表达量及可溶性，我们提供多种融合标签的筛选 1-2 周
不同融合标签构建
02 小试表达及优化 各种载体以及不同反应条件筛选优化，SDS-PAGE电泳以及FSEC检测，以确定最优反应条件 我们的无细胞表达系统可进行高通量筛选，以提供最优的蛋白表达条件 1-3 天
03 放大纯化 可以进行ml级别以上的放大体系表达 针对膜蛋白，我们可以提供不同去垢剂，脂质体，Nanodisc筛选服务 3-5 天
可以通过亲和、离子交换及分子筛等多种层析方法纯化目的蛋白
04 质控 进行纯度、浓度等检查，并提供包括LC-MS在内的各项QC报告 - 1 天
20 天

实验流程

  • DNA模板

    基于T7 启动子的质粒

    -

    PCR 产物

    -

    mRNA

  • 蛋白表达（2天）

    “一锅法”反应

    -

    高通量筛选

  • 表达检测

    SDS-PAGE检测

    -

    WB/Protein Simple

    -

    FSEC

案例展示

绿色荧光蛋白sfGFP的表达

Biortus E. coli 无细胞蛋白表达系统可以高效率表达各类蛋白，例如将试剂盒组分与绿色荧光蛋白质粒混合反应，无需紫外光照射，即可观察到绿色荧光蛋白发出的荧光。

硒代半胱氨酸和硒代甲硫氨酸的标记

Biortus E. coli 无细胞蛋白表达系统可以实现硒代氨基酸的标记，将需要标记的硒代氨基酸与试剂盒组分混合反应数小时即可实现相应硒代氨基酸的标记。

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