蛋白切割酶
在蛋白质重组表达过程中通常会构建融合蛋白或多肽标签以便于重组蛋白的表达,示踪和纯化等,标签主要分为两种,一种是用于亲和纯化的标签:6*His,GST,Strep,MBP,Flag和组合式双标签或多标签;另一种是增加蛋白可溶性和帮助蛋白正确折叠标签:GST,SUMO, MBP,TrxA,NusA等。
其中,GST,MBP,SUMO等蛋白标签由于分子量较大,通常需要酶切去除,以消除其对目标蛋白的结构与功能的影响。多肽标签(6*His,Strep,Flag等)分子量较小,免疫原性较低,基本不影响蛋白质的结构和功能,通常可以不用酶切去除,但用于结构生物学或其他较高级研究的蛋白通常也要将小分子量多肽标签酶切去除,以达到最佳效果。
去除标签的方法在于质粒构建时插入酶切位点相应的氨基酸识别序列。常用的蛋白酶及对应的酶切位点如下表:
蛋白酶 | 识别序列 |
---|---|
TEV Protease | ENLYFQ↓G(S) |
SUMO Protease | …EQIGG↓ |
HRV 3C Protease | LEVLFQ↓GP |
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